紫外可見(jiàn)分光光度計的工作測試原理

紫外可見(jiàn)分光光度計的工作原理是具有限制性條件，分光光度計的工作原理是物質(zhì)對光的選擇吸收和瑯伯-比爾定律。我們這里討論瑯伯-比爾定律的限制性條件。

通過(guò)溶液的光必須是平行的;通過(guò)溶液的光必須是單色光;待測溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過(guò)高，這是瑯伯-比爾定律首要的三個(gè)前提條件。但是在實(shí)際的紫外可見(jiàn)分光光度計的制造和使用過(guò)程中這三個(gè)條件是不可能達到的。因為光是直線(xiàn)傳播的，在分光光度計制造過(guò)程中，燈源發(fā)出的光是發(fā)散的，經(jīng)過(guò)聚焦鏡進(jìn)行聚焦等直到經(jīng)過(guò)溶液的整體過(guò)程中，光是不可能平行的。

燈源發(fā)出的光是復合光，經(jīng)過(guò)狹縫，再經(jīng)過(guò)光柵分光等步驟，因為受到狹縫和光柵本身的限制，光柵分光不可能達到純單色光。還有光度計的整體設計問(wèn)題，光度計不可能沒(méi)有其它的雜光存在。用戶(hù)的溶液也不可能是純凈的，也會(huì )含有一些雜質(zhì)，這些對光度的吸收都會(huì )存在影響。

除以上三個(gè)方面的影響外，在實(shí)際的光度計應用過(guò)程中還會(huì )存在其他因素的影響，例如：經(jīng)過(guò)比色皿的光是否垂直;比色皿寬度是否為10mm的標準值;測試波長(cháng)是否準確;程序設計是否存在漏洞等等，都會(huì )直接影響到利用瑯伯-比爾定律計算出的結果。所以在日常的測試過(guò)程中，得出的結果和瑯伯-比爾定律有些偏差是很正常的，只是我們關(guān)注偏差多少的問(wèn)題。