紫外可見(jiàn)分光光度計原理是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。
紫外可見(jiàn)分光光度計原理的使用注意事項
(1)預熱是保證儀器準確穩定的重要步驟。
(2)比色皿的清潔程度,直接影響實(shí)驗結果.因此,特別要將比色皿清洗干凈.先用自來(lái)水將用過(guò)的比色皿反復沖洗,然后用蒸餾水淋洗,倒立于濾紙片上,待干后再收回比色皿盒中.必要時(shí),還要對比色皿進(jìn)行更精細的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡,沖洗。
(3)比色皿與分光光度計應配套使用,否則會(huì )引起較大的實(shí)驗誤差.比色皿不能單個(gè)調換1.37200型光柵分光光度計的使用注意事項。
(4)比色皿內盛液應為其容量的2/3,過(guò)少會(huì )影響實(shí)驗結果,過(guò)多易在測量過(guò)程中外溢,污染儀器.比色皿中試樣裝入量應為2/3～3/4之間。
(5)拿放比色皿時(shí),應持其"毛面",杜絕接觸光路通過(guò)的"光面".如比色皿外表面有液體,應用綢布拭干,以保證光路通過(guò)時(shí)不受影響。
(6)若待測液濃度過(guò)大,應選用短光徑的比色皿,一般應使吸光度讀數處于0.1～0.8范圍內為宜.由于測定空白,標準和待測溶液時(shí)使用同樣光徑的比色皿,故不必考慮因光徑變化而引起的影響。
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(cháng)的光能量，相應地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)問(wèn)相互作用的有效手段。
此后，紫外可見(jiàn)分光光度計經(jīng)不斷改進(jìn)，又出現自動(dòng)記錄、自動(dòng)打印、數字顯示、微機控制等各種類(lèi)型的儀器，使光度法的靈敏度和準確度也不斷提高，其應用范圍也不斷擴大。紫外可見(jiàn)分光光度法從問(wèn)世以來(lái)，在應用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎上，促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng )新，功能更加齊全，使得光度法的應用更拓寬了范圍。目前，分光光度法已為工農業(yè)各個(gè)部門(mén)和科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域所廣泛采用，成為人們從事生產(chǎn)和科研的有力測試手段。
分光光度分析就是根據物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息?？梢杂脴藴使鈭D譜再結合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比；如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見(jiàn)吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應*一致。如果沒(méi)有標樣，也可以和現成的標準譜圖對照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。
實(shí)驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
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