光度計采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源，光線(xiàn)透過(guò)測試的樣品后，部分光線(xiàn)被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
光度計由于分子中的某些基團吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，根據這一特性，可對物質(zhì)進(jìn)行定性分析。由于物質(zhì)濃度的不同，吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度也不相同，從而通過(guò)對物質(zhì)吸光度或透過(guò)率的測量判定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。
光度計使用的方法與步驟：
?。?）預熱儀器：
為使測定穩定，將電源開(kāi)關(guān)打開(kāi)，使儀器預熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續光照。預熱儀器時(shí)和在不測定時(shí)應將比色皿暗箱蓋打開(kāi)，使光路切斷。
?。?）選定波長(cháng)：
根據實(shí)驗要求，轉動(dòng)波長(cháng)調節器，使指針指示所需要的單色光波長(cháng)。
?。?）固定靈敏度檔：
根據有色溶液對光的吸收情況，為使吸光度讀數為0.2～0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動(dòng)靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗過(guò)程中不再變動(dòng)。一般測量固定在“1”檔。
?。?）調節“0”點(diǎn)：
輕輕旋動(dòng)調“0”電位器，使讀數表頭指針恰好位于透光度為“0”處（此時(shí)，比色皿暗箱蓋是打開(kāi)的，光路被切斷，光電管不受光照）。
?。?）調節T=100：
將盛蒸餾水(或空白溶液或純溶劑)的比色皿放入比色皿座架中的第一格內，有色溶液放在其它格內，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉動(dòng)光量調節器，使透光度T=100，即，表頭指針恰好指在T=100處。
?。?）測定：
輕輕拉動(dòng)比色皿座架拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，此時(shí)表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A，讀數后，打開(kāi)比色皿暗箱蓋。
?。?）關(guān)機：
實(shí)驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
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